《重生08,我被确诊为医学泰斗》 第200章 35%(感谢牛津面的盟主!)
学校的实验室条件没那麽好。
空调老化,地方不大,房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这麽有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs16网吧赛0
时过境迁。
曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反覆吹打。
王晓晴观察片刻後说:「测一下吧。」
蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活,转头问道:「多少?」
蔡卓群:「浓度12ngul,a260280比值是132,a260230比值是07。
c
王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:「这已经是第四批废样了————」
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入d的方法,解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题——
现在的瓶颈,卡在了提取上。
irna在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260280的比值正常应该在18到20之间,低於18就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260230比值只有07,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,後面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因:「王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。」
王晓晴摇摇头:「上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ngul以下。」
陆晓林在一旁分析:「血清里全是蛋白,游离的核酸少,trizoi提取法,用在血清上,天生就有缺陷。」
实验室众人,陷入沉默。
其实在後世,有专门针对血清的柱提法商业试剂盒,傻瓜式操作,半个小时就能得到高纯度的irna。
但在08年,专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。
蔡卓群问:「王教授,有什麽办法没?」
王晓晴:「别问我,江河呢?江河去哪儿了?」
陈浩举手:「
空调老化,地方不大,房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这麽有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的cs16网吧赛0
时过境迁。
曾经的4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反覆吹打。
王晓晴观察片刻後说:「测一下吧。」
蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到nanodrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活,转头问道:「多少?」
蔡卓群:「浓度12ngul,a260280比值是132,a260230比值是07。
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王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:「这已经是第四批废样了————」
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入d的方法,解决了pcr扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题——
现在的瓶颈,卡在了提取上。
irna在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的rna酶降解。
纯度不够。
a260280的比值正常应该在18到20之间,低於18就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而a260230比值只有07,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,後面的pcr扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因:「王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。」
王晓晴摇摇头:「上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ngul以下。」
陆晓林在一旁分析:「血清里全是蛋白,游离的核酸少,trizoi提取法,用在血清上,天生就有缺陷。」
实验室众人,陷入沉默。
其实在後世,有专门针对血清的柱提法商业试剂盒,傻瓜式操作,半个小时就能得到高纯度的irna。
但在08年,专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。
蔡卓群问:「王教授,有什麽办法没?」
王晓晴:「别问我,江河呢?江河去哪儿了?」
陈浩举手:「
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